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AML12小鼠肝細胞傳代/復蘇技巧
點(diǎn)擊次數:74 更新時(shí)間:2024-07-02

AML12小鼠肝細胞

Mouse liver cells ,AML-12

貨號:YJ-m003(種屬鑒定)

價(jià)格: 2500.0

規格: 1*106

細胞介紹

AML12α小鼠肝臟12)細胞系由來(lái)自針對人TGFα的轉基因小鼠(CD1菌株,品系MT42)的肝細胞建立。通過(guò)電子顯微鏡觀(guān)察,這些細胞表現出典型的肝細胞特征,例如過(guò)氧化物酶體和膽小管樣結構。AML12細胞保留表達血清(白蛋白,α1抗胰蛋白酶和轉鐵蛋白)和間隙連接(連接蛋白2632)蛋白的高水平mRNA的能力,并且僅含有乳酸脫氫酶的同工酶5。細胞表達高水平的人TGFα和較低水平的小鼠TGFα。

肝臟特異性蛋白質(zhì)的表達在培養中隨時(shí)間降低,但通過(guò)在無(wú)血清培養基中培養細胞而重新激活。。

細胞特性

1 來(lái)源:小鼠,肝

2 形態(tài):上皮樣細胞 貼壁生長(cháng)

3 含量:>1x10 細胞數

4 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5 用途:僅供科研使用。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T251-2mL,T752-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml10%FBS的培養基來(lái)終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力,后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。

AML12小鼠肝細胞.png


下面T25瓶為例;

1. 細胞凍存時(shí)按照細胞傳代的過(guò)程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來(lái)決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱(chēng)、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過(guò)夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

 

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